Page 70 - 《南京医科大学学报》2026年第1期

第46卷第1期
· 64 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2026年1月

表5 不同剪接模式的比例
Table 5 Proportion of different splicing patterns （%，x ± s）
Variant WT Exon 4 skipping 96 nt deletion 2 nt insert Frame shift
Eoxn 4 96.18 ± 2.90 003.82 ± 2.90 0.00 ± 0.00 00.00 ± 0.00 00.00 ± 0.00
c.278⁃1G>T 0.00 ± 0.00 097.09 ± 2.61 2.91 ± 2.61 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00
c.278⁃1G>C 0.00 ± 0.00 097.69 ± 2.05 2.31 ± 2.05 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00
c.278⁃1G>A 0.00 ± 0.00 096.56 ± 0.47 3.44 ± 0.47 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00
c.278⁃2A>T 0.00 ± 0.00 092.63 ± 1.28 7.37 ± 1.28 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00
c.278⁃3A>G 2.60 ± 0.12 000.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 97.40 ± 0.12 0.00 ± 0.00
c.391delG 0.00 ± 0.00 064.20 ± 5.43 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 35.80 ± 5.43
c.391+1G>T 0.00 ± 0.00 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00
c.391+1G>A 0.00 ± 0.00 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00
c.391+1G>C 0.00 ± 0.00 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00
c.391+1insT 0.00 ± 0.00 082.27 ± 6.72 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 17.73 ± 6.72
c.391+2T>A 0.00 ± 0.00 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00
c.391+2T>C 0.00 ± 0.00 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00
c.391+5G>A 0.78 ± 1.35 099.22 ± 1.35 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00
c.391+5delG 0.00 ± 0.00 100.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00
c.391+7A>G 98.38 ± 0.54 001.62 ± 0.54 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00 0.00 ± 0.00

（%） 110 WT Exon 4 skipping 96 nt deletion of exon 4 2 nt insert of intron 3 Frameshift mutation
Proportion of different splicing forms 100
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
4
Eoxn c.278⁃1G>T c.278⁃1G>C c.278⁃1G>A c.278⁃2A>T c.278⁃3A>G c.391delG c.391+1G>T c.391+1G>A c.391+1G>C c.391+1insT c.391+2T>A c.391+2T>C c.391+5G>A c.391+5delG c.391+7A>G

Acceptor site Donor site
图5 转录本中不同剪接模式的定量分析（n=3）
Figure 5 Quantification of different splicing patterns in transcripts（n=3）

剪接位点突变对 pre⁃mRNA 加工的显著影响，还揭 示，细胞内WT FⅨ在55 kDa呈现特征性双条带，提
示了不同突变诱导异常剪接的效率差异，为理解 示可能存在蛋白翻译后修饰机制（图 6A）。与此形
HB发病的分子机制提供了重要依据。 成对比的是，突变型FⅨ仅检测到单一蛋白条带，且

2.6 异常剪接转录本的体外表达特征及功能分析 分子量明显低于野生型 FⅨ，这与截断转录本编码
为系统阐明异常转录本对FⅨ蛋白表达和功能 的缺陷蛋白分子量减小相吻合。另外，值得注意的
的影响，本研究构建了 FⅨ WT 和两种框内异常剪 是，分泌的WT FⅨ在72 kDa处出现明显条带，显著
接转录本（外显子 4 供体端缺失 96 nt 和外显子 4 跳 大于细胞内 FⅨ，推测其源于分泌过程中的各种修
跃）的外源表达载体。将成功构建的载体瞬时转染 饰。经 3 次独立实验的统计分析表明，两种突变
293T细胞，培养48 h后收集细胞裂解物和上清液，分 型 FⅨ蛋白：p.D93⁃G125delinsG和p.G94⁃D131del与
别用于检测FⅨ的合成和分泌。Western blot 结果显 WT FⅨ相比，胞内蛋白表达水平显著降低（P <