Page 13 - 南京医科大学自然版

第46卷第10期 王新新，黄伯贤，陆嘉逢. PUS7通过mRNA假尿嘧啶化调控胚胎发育过程中神经
2026年10月 谱系分化平衡［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2026，46（10）：1437-1449 ·1443 ·

A B
WT Pus7⁃KO 1.5 WT
Pus7⁃KO
*
mRNA level 1.0
0.5
500 μm
0
Sox2 Oct4 Nanog Klf4

C WT Pus7⁃KO WT Pus7⁃KO D WT
Pus7⁃KO
NANOG 37 kDa KLF4 60 kDa
1.5 *
Protein level
Tubulin 55 kDa GAPDH 36 kDa 1.0
WT Pus7⁃KO WT Pus7⁃KO 0.5
SOX2 37 kDa OCT4 37 kDa
0
SOX2 OCT4 NANOG KLF4
Tubulin 55 kDa Tubulin 55 kDa

E F
1.4 WT⁃Rep1 WT⁃Rep2 WT⁃Rep3
WT
nm） 1.2 Pus7⁃KO *** 1 000 1 000 1 000
800
800
800
（450 1.0 * Count 600 600 600
D
0.8
400 400 400
0.6 200 200 200
6 h 24 h 48 h
0 0 0
0 3 3 3 3 3 0 3 3 3 3 3 0 3 3 3 3 3
G WT 50×10 100×10 150×10 200×10 250×10 50×10 100×10 150×10 200×10 250×10 50×10 100×10 150×10 200×10 250×10
（%） 50 *** ** KO⁃Rep1 KO⁃Rep2 KO⁃Rep3
Pus7⁃KO
Cell cycle distribution 30 Count 1 000 1 000 1 000
40
800
800
800
20
600
600
600
10
400
0
S
G2/M
G1
200
200 400 400
200
0 0 0
0 3 3 3 3 3 0 3 3 3 3 3 0 3 3 3 3 3
50×10 100×10 150×10 200×10 250×10 50×10 100×10 150×10 200×10 250×10 50×10 100×10 150×10 200×10 250×10
A：Bright⁃field images of WT and Pus7⁃KO mESC（Scale bar=500 μm）. B：qRT⁃PCR analysis of the mRNA expression of pluripotency⁃associated
genes（Sox2，Oct4，Nanog，and Klf4）in WT and Pus7⁃KO mESC（n=3）. C：Western blot analysis of SOX2，OCT4，NANOG，and KLF4 protein expression
in WT and Pus7⁃KO mESC（n=3）. D：Quantification of SOX2，OCT4，NANOG，and KLF4 protein expression. Protein levels were normalized to TUBULIN
or GAPDH and expressed relative to WT（n=3）. E：CCK⁃8 assay showing the growth curves of WT and Pus7⁃KO mESCs，as measured by absorbance at
450 nm（n=3）. F：Cell⁃cycle distribution of WT and Pus7⁃KO mESC analyzed by PI staining followed by flow cytometry. G：Quantification of the percent⁃
**
*
ages of cells in G1，S，and G2/M phases in WT and Pus7⁃KO mESC（n=3）. P < 0.05，P < 0.01，and *** P < 0.001.
图2 Pus7敲除未显著破坏mESC核心多能性网络，但导致G1期延长
Figure 2 Pus7 knockout did not markedly disrupt the core pluripotency network of mESC but prolonged the G1 phase
聚集（图 4B），上述形态学观察提示，Pus7 敲除可能 4C），qRT⁃PCR 结果与 RNA⁃seq 变化趋势保持一致
影响神经诱导过程中细胞的排列状态及形态变化。 （图 4D）。在蛋白水平上，检测了 SOX1 和 PAX6 的
本研究对分化 d0 和 d3 的细胞进行了 RNA⁃seq 表达。Western blot结果显示，KO组PAX6蛋白表达
和分析，结果显示在神经定向分化过程中，KO 组神 高于WT组（图4E）；免疫荧光和流式分析结果显示，
经祖细胞相关基因 Sox1、Pax6 显著升高，而与后续 KO 组 SOX1 免疫荧光信号明显增强（图 4F）且阳性
神经元成熟相关的 Map2、Ncam1 等基因下降（图 细胞比例升高（图 4G、H）。综上，Pus7 缺失导致了