Page 56 - 南京医科大学自然版
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第46卷第10期
               ·1486 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2026年10月


              有高度保守的 miR⁃18a 结合位点，且 TSP⁃1 是已知                   模型，系统评估了 EA 在缺血性脑组织的保护作
              的强效内源性血管新生抑制剂。提示EA可能通过                            用。研究发现，EA 通过抑制 OGD 诱导的 RBMEC
              上调 miR⁃18a，靶向抑制 Thbs⁃1 转录，解除 TSP⁃1 对              凋亡、促进血管新生相关功能（增殖、迁移及管形
              血管新生的抑制作用，发挥神经保护作用。                               成），改善脑缺血性损伤；同时 EA 预处理可改善
              2.5  EA 通过 miR⁃18a 靶向抑制 TSP⁃1 表达的实验               MCAO 模型大鼠的神经功能，减轻 MCAO 模型脑细
              验证                                                胞损伤以及凋亡。通过 miRNA 微阵列以及双荧光
                  qRT⁃PCR结果显示，与OGD组相比，EA干预后                     素酶报告基因等证明 EA 通过 miR⁃18a/TSP⁃1 轴发
              RBMEC miR⁃18a表达显著增加（P < 0.01，图4E）；此               挥保护作用，为 IS 的治疗提供了新的实验依据与
              外，WB 显示，与 NC 组相比，转染 miR⁃18a mimic 的               作用靶点。
              RBMEC TSP⁃1 表达水平显著下调（图 4F~G），初步                        EA是一种广泛存在于果蔬中的天然多酚，具有
              证实二者存在明确的调控关系。                                    抗氧化、抗炎及抗凋亡等多重药理活性，并已证明

                  为进一步确认miR⁃18a是否通过直接结合Thbs1                    在IS的相关研究中发挥脑保护作用                ［17-18，21］ 。陈敏纯
              3′⁃UTR 发挥抑制作用，本研究构建了包含 WT 或                       等 ［19］ 通过 MCAO 模型证实 EA 通过激活 PGC⁃1α/
              MUT Thbs1 3′⁃UTR 序列的双荧光素酶报告载体。                    Nrf2 通路、减轻氧化应激，从而发挥脑保护作用；
              结果显示，共转染miR⁃18a mimic 与WT报告载体可                    Hu 等 ［21］ 在缺血再灌注损伤模型中证明 EA 可通过
              显著降低荧光素酶活性；而当 Thbs1 3′⁃UTR 上的                     抑制 NLRP6 炎症小体激活来缓解神经炎症，从而
              miR⁃18a 结合位点发生突变后，这一抑制效应完全                        发挥神经保护作用。此外，研究表明 EA 可通过调
              消失（图4H）；证实miR⁃18a能够靶向结合 Thbs1 3′⁃                 节凋亡相关蛋白表达，减轻MCAO 模型大鼠的脑组
              UTR，在转录后水平特异性抑制其表达。                               织损伤   ［18］ 。尽管本研究未进行 MCAO 模型中神经
              2.6  抑制miR⁃18a抵消了EA对RBMEC的保护作用                    损伤相关标志的检测，但临床表现和病理结果与上
                  为验证miR⁃18a在EA保护作用中的必要性，在                      述发现一致，EA 在 MCAO 模型中改善神经功能、减
              RBMEC 接受 OGD 及 EA 处理前，预先转染 miR⁃18a                轻病理损伤以及神经细胞凋亡；剂量依赖地减轻
              antagomir（Antagomir 组）或阴性对照（NC 组）；结果              OGD诱导的RBMEC凋亡，调控Bcl⁃2/Bax蛋白平衡，
              显示，转染 miR⁃18a antagomir 可显著阻断 EA 对                恢复 RBMEC 的增殖、迁移及管形成能力，且对线粒
              RBMEC 的抗凋亡效应；TUNEL 染色及 FCM 结果显                    体超微结构具有保护作用。EA 对线粒体的保护作
              示，Antagomir 组的凋亡细胞比例显著高于 NC 组                     用已在神经退行性疾病的研究中得到证实                     ［22］ 。然
             （P < 0.01，图 5A~D），接近OGD组水平。WB进一步                   而，与以往研究聚焦于 EA 的抗氧化、抗炎、抗凋亡
              证实，与 NC 组相比，Antagomir 组 Bcl⁃2 表达显著下               作用不同，本研究首次揭示 EA 通过调控 miRNA 介
              调，Bax表达显著上调（P均 < 0.05，图 5E~G）。                    导的信号通路促进血管的新生，弥补了 EA 在 IS 血
                  与之相似，抑制miR⁃18a后，EA对RBMEC的促                    管修复领域研究的空白，丰富了其脑保护作用的分
              增殖、迁移、成管作用亦显著减弱；EdU 实验显示，                         子机制网络。
              Antagomir组的细胞增殖数量较NC组显著减少（P <                          miRNA作为基因表达的精细调控者，在卒中后
              0.05，图 6A、B）；WB进一步验证了这一结果，细胞中                     的病理生理过程中扮演关键角色                 ［6，23］ 。其中，miR⁃
              PCNA 与 Cyclin D1 的表达水平显著低于 NC 组（P <               18a 表达异常与多种血管性疾病相关                ［8，11，13-14］ ，也被
              0.05，图 6C~G）。功能学实验证实，EA 对 OGD 损伤                  证实与 IS 相关。张红利等           ［12］ 发现在 IS 中人群中
              RBMEC 迁移能力及管形成能力的改善作用，在                           miR⁃18a 表达降低，且与不良预后相关。在 SAH 模
              miR⁃18a被抑制后基本消失（图 6F~I）。                          型中也检测到miR⁃18a的低表达，而过表达miR⁃18a
                  此外，与 NC 组相比，Antagomir 组 EA 的线粒体               则可以阻止神经元凋亡和氧化应激，增强神经元的
                                                                    ［9］
              保护效应基本消失，细胞的线粒体肿胀程度与                              活性 。本研究发现在大鼠MCAO模型的缺血脑组
              OGD 组相近（图6J）。提示EA对线粒体结构完整性                        织中 miR⁃18a 表达下调，而 EA 预处理可增加其表
              的维持同样依赖于miR⁃18a的调控。                               达；并且通过HE染色发现EA预处理可减轻缺血区
                                                                域脑组织的损伤。提示 miR⁃18a 可能是 EA 调控缺
              3 讨 论
                                                                血后修复的关键靶点。

                  本研究通过体外 OGD 细胞模型与大鼠 MCAO                           通过 miRWalk、TargetScan 及 StarBase 数据库交
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