Page 33 - 《南京医科大学学报》自然科学版2026年第2期
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第46卷第2期      黄蓓蓓，宁     松，吴慧敏，等. 不同性别来源人胚胎干细胞与羊膜间充质干细胞外泌体蛋白质组学与
                  2026年2月              miRNA谱分析［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2026，46（2）：188-201                  ·189 ·


                potential applications across multiple domains. These findings provide novel perspectives for selecting optimal cell sources in
                preclinical and clinical trials.
               ［Key words］ exosomes；human amniotic mesenchymal stem cells；human embryonic stem cells；miRNA；proteome
                                                                              ［J Nanjing Med Univ，2026，46（02）：188⁃201］






                    过去几年，以再生子宫内膜、改善卵巢功能为                          能具有更强的降解结缔组织的能力                  ［17］ 。据此推测
                目的的干细胞治疗被认为是治疗女性生殖系统疾                             不同性别来源和干细胞来源的外泌体可能在功能
                病最有前途的策略。然而，在临床条件下，无论是                            上也存在一定的差异。
                采取静脉注射或子宫内注射干细胞，亦或是通过生                                本研究选择男性和女性hESC及hAMSC来源的
                物材料封装干细胞，干细胞疗法都存在免疫排斥、                            外泌体进行蛋白质组和miRNA谱系研究，旨在为外
                                ［1］
                致瘤风险等局限性 。                                        泌体的临床应用提供新的见解，以指导临床根据需
                    外泌体是细胞外囊泡（extracellular vesicle，EV）           要选择更具有针对性的干细胞，实现精准治疗。
                的一种   ［2-3］ ，直径在 30~200 nm 之间，在电子显微镜
                                                                  1 材料和方法
                下呈杯状外观。存在于细胞培养物的上清液或血
                                         ［4］
                液、精液、尿液等多种体液中 ，可通过旁分泌活动                           1.1 材料
                介导复杂的生理和病理过程，包括器官与生殖发                             1.1.1  实验细胞株
                育、抗原提呈、神经元通讯、免疫应答、衰老调控以                               经南京医科大学第一附属医院地方机构审查
                及细胞增殖     ［5-6］ 。                                 委员会批准（批准日期：2008-07-16），女株AMSC13
                    外泌体因其生物安全性、稳定性、无非整倍性                          及男株AMSC15构建自正常足月分娩产妇自愿捐献
                和低免疫原性而受到广泛关注，成为干细胞治疗的                            新鲜胎盘组织       ［18］ 。经南京医科大学第一附属医院
                有效替代品      ［7- 8］ 。已有报道经血干细胞（menstrual            伦理委员会批准（批准号：2012-SR-128），女株
                blood⁃derived stromal cell，MenSC）、人胚胎干细胞          CCRM28及男株CCRM22构建自辅助生殖技术中不
               （human embryonic stem cell，hESC）、人羊膜间充质干细          孕症受试者自愿提供的囊胚，通过矫正多倍体受精
                胞（human amniotic mesenchymal stem cell，hAMSC）、    卵获得二倍体囊胚成功建系             ［19-20］ 。以上均获得患者
                人脂肪间充质干细胞（human adipose mesenchymal               签署的书面知情同意书。
                stem cell，hADSC）等来源的外泌体在创伤、生殖、眼                   1.1.2  试剂与耗材
                科疾病中发挥改善内皮衰老、促进血管生成、加速                                mTeSR1 Basal Medium、mTeSR1 Supplement
                细胞迁移、改善纤维化、促进伤口愈合等作用                   ［9-14］ 。  （Stem Cell 公 司 ，加 拿 大 ）；ncEpic Supplement
                    目前研究人员主要根据可及性选择不同来源                          （125x）、ncEpic Basal Medium（安徽首宁生物科技有
                干细胞进行外泌体研究。外泌体富含蛋白质、核酸                            限公司）；Matrigel（Corning 公司，美国）；UltraGRO
                和脂质等多种生物活性物质，具有与亲代细胞相似                           （AventaCell公司，美国）；L⁃谷氨酰胺溶液（北京索莱
                          ［8］
                的治疗效果 ，因此不同细胞来源的外泌体可能带                            宝科技有限公司）；α⁃MEM（北京兰杰柯科技有限
                有亲代细胞功能特征。既往个别研究对人多能干                             公司）；肝素钠（常州千红生化制药有限公司）；
                细胞、胚胎干细胞和脐带间充质干细胞进行过蛋白                            MSC NutriStem XF supplement（以色列生物技术公
                质组或 miRNA 表达谱的描述           ［15- 16］ 。然而，来源于       司）；BCA 蛋白浓度测定试剂盒（上海碧云天生物
                hAMSC的外泌体组学相关研究尚未见报道，更未关                          技术有限公司）；NANOG 抗体、TRA⁃1⁃60 抗体（Cell
                注男性株系与女性株系来源的外泌体是否存在生                             Signaling Technology公司，美国）；OCT4抗体、SSEA4
                物学差异。2016 年本实验室曾对脐带间充质干细                          抗体、CD9 抗体、CD63 抗体、TSG101 抗体、Calnexin
                胞、羊膜间充质干细胞、胚胎干细胞男女株培养上                            抗体（Abcam 公司，美国）；CD73 抗体、CD90 抗体、
                清中的细胞因子进行比较，发现女性脐带间充质干                            CD105 抗体、CD44 抗体、CD11b 抗体、CD19 抗体、
                细胞可能具有更好地促进细胞生长、改善血供的能                            CD34 抗体、CD45 抗体、HLA⁃DR 抗体（BD 公司，
                力，而男性脐带间充质干细胞和女性胚胎干细胞可                            美国）。
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