Page 37 - 《南京医科大学学报》自然科学版2026年第2期

第46卷第2期 黄蓓蓓，宁 松，吴慧敏，等. 不同性别来源人胚胎干细胞与羊膜间充质干细胞外泌体蛋白质组学与
2026年2月 miRNA谱分析［J］. 南京医科大学学报（自然科学版），2026，46（2）：188-201 ·193 ·

A B 1.6 hESC⁃exo⁃Female 1.2 hAMSC⁃exo⁃Female
（particles/mL） 1.2 （particles/mL） 0.8
hESC⁃exo hAMSC⁃exo 1.4 106 1.0 149

1.0
Female 0.8 0.6
Concentration 0.4 169 232 Concentration 0.2
0.6
0.4
0.2
338
478
591
457
730
1000
719
0
0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 0 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000
Size（nm） 1.6 hAMSC⁃exo⁃Male
Size（nm）
（particles/mL） 6.0 197 （particles/mL） 1.4 146
hESC⁃exo⁃Male
5.0
Male 4.0 1.0
1.2
0.8
Concentration 3.0 Concentration 0.6
2.0
0.4
1.0
0.2
401
271
424
1000
851
600
684
0
0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000 0 0 100 200 300 400 500 600 700 800 900 1000
Size（nm） Size（nm）
C hAMSC hESC
cell exo cell exo
D
Calnexin kDa 800 *** Female
Male
Particles per cell 400
CD63 kDa 600
TSG101 kDa 200
0
CD9 kDa
hESC⁃exo hAMSC⁃exo
A：Representative TEM images of exosomes derived from hESCs and hAMSCs. Scale bar：100 nm. B：Size distribution of exosomes measured by
NTA. C：Western blot analysis of Calnexin，CD63，CD9，and TSG101 expression levels in cells and exosomes. D：Evaluation of mean exosomes yield per
cell. All data are presented as mean±standard deviation（SD）and analyzed by t⁃test. *** P < 0.001。
图2 hESC⁃exo和hAMSC⁃exo的分离和鉴定
Figure 2 Isolation and Characterization of hESC⁃exo and hAMSC⁃exo
男株与女株间差异性较小。热图分析显示，女性 代谢、血清素能突触传递等（图5E）。男女株hAMSC⁃
hAMSC⁃exo（簇 1）中上调蛋白主要富集于人乳头瘤 exo 共享蛋白显著富集于补体和凝血级联反应、黏
病毒感染、细胞凋亡相关通路；男株 hAMSC⁃exo（簇 着斑形成、肌肉细胞中的细胞骨架、细胞外基质
2）中蛋白主要富集于蛋白酶体、抗叶酸耐药性、叶 （extracellular matrix，ECM）与受体间相互作用、上皮
酸转运与代谢相关通路（图5B）。 细胞的细菌入侵、肌动蛋白细胞骨架调节、内吞作
维恩图分析提示女株hAMSC⁃exo和男株hAMSC⁃ 用、内质网蛋白加工、沙门氏菌感染、溶酶体等通路
exo 分别具有 156 个及 152 个特异表达蛋白，同时存 （图 5F）。上述信号通路均与重塑代谢和免疫微环
在1 263个共享蛋白（图5C）。 境相关。
KEGG 富集分析表明，女株 hAMSC⁃exo 特异表 2.5 男女株hESC⁃exo和hAMSC⁃exo miRNA谱特征
达蛋白显著富集于免疫调节相关的信号通路，如核 2.5.1 hESC⁃exo男株与女株的比较
糖体、冠状病毒疾病、蛋白酶体、脊髓小脑性共济失 对男女株hESC⁃exo进行miRNA差异表达分析，
调、致病性大肠杆菌感染、朊病毒病等（图 5D）。男 检测到80个差异表达miRNA（图6A）。热图分析显
株 hAMSC⁃exo 特异表达蛋白显著富集于代谢调控 示，女株 hESC⁃exo（簇 1）中上调的 miRNA 主要参与
及免疫相关信号通路，如甲状腺激素信号通路、 胆碱能突触、黏着斑形成、催产素信号通路、MAPK
Apelin信号通路、动物线粒体自噬、癌症中的中枢碳 信号通路、轴突引导等通路。男株 hESC⁃exo（簇 2）