Page 24 - 南京医科大学自然版

第46卷第5期
·646 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2026年5月

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失。p53 经 IHC 染色后，如肿瘤细胞核呈现均匀且 POLE突变型 ；②当检测到2个或以上微卫星位点
弥漫性强阳性表达（阳性率≥80%）；或完全缺失表 不稳定时，判读为微卫星高度不稳定（microsatellite
达，未检测到抗体信号；或仅胞质表达而无法进入 instability⁃high，MSI⁃H）；1个位点不稳定为微卫星低
细胞核；或肿瘤细胞呈现强弱不等的差异性染色。 度不稳定（microsatellite instability⁃low，MSI⁃L）；所有
出现上述任一现象则为 p53 蛋白表达异常，判定为 位点均稳定即为微卫星稳定（microsatellite stable，
p53突变型，否则为p53野生型。 MSS）；③TP53 基因发生任何无义突变、错义突变、
Sanger 测序：所有组织标本均经 10%中性福尔 插入缺失、移码突变等变异，均提示其为突变状态。
马林固定，常规脱水、石蜡包埋，制备 5 μm厚切片， 1.2.2 分子分型判读标准
脱蜡脱水后刮取肿瘤组织，常规提取、纯化DNA后， 按照第5版世界卫生组织（World Health Organi⁃
［3］
根据文献报道设计合成引物 ，PCR 扩增后获取 zation，WHO）推荐的分类标准，分子分型分为 4 种：
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PCR 产物。委托厦门艾德生物医药科技有限公司 POLE mut 型、dMMR 型、NSMP 型、p53abn 型 。基
进行 Sanger 测序，将测序结果与 GenBank 标准序列 于不同检测平台，其判读流程如下：①IHC 联合
进行比对，观察序列有无突变。 Sanger 测序组首先通过 Sanger 测序检测 POLE 基因
1.2.1.2 NGS测序 外切酶结构域，存在热点突变者确定为 POLEmut

从石蜡包埋组织中提取肿瘤 DNA，采用 BPTM 型；随后通过 IHC 检测 MMR 蛋白（MLH1、PMS2、
Plus 检测试剂盒（货号：8.06.0165，厦门艾德生物医 MSH2、MSH6）的 表 达 ，任 一 蛋 白 缺 失 则 判 定 为
药科技股份有限公司）进行文库构建。将DNA预变 dMMR 型；剩余病例进一步进行p53 IHC 检测，若呈
性后，加入特异性探针进行杂交捕获靶基因区域， 现过度表达或完全缺失模式，则归类为 p53abn 型；
随后进行延伸连接、酶切纯化，再使用带双端索引 其余无上述特征的病例划分为NSMP型。②NGS组

的引物进行PCR扩增。纯化后的文库经质控（总量≥ 首先基于测序数据分析 POLE 基因外切酶结构域，
150 ng）后上机进行双末端测序。对数据执行质控 存在致病性热点突变者为 POLEmut 型；其次通过
后，利用配套生物信息学软件检测POLE基因（外切 MSI 分析或 MMR 基因突变及杂合性缺失状态判断
酶结构域、Exon 3~14及Exon 19部分区域）、TP53基 dMMR型；剩余病例依据TP53基因是否存在致病性
因全编码区的序列变异以及微卫星不稳定性状 突变区分 p53abn 型与 NSMP 型。全部流程遵循系
态。NGS 测序委托厦门艾德生物医药科技有限公 统、逐层分类的原则（图1）。
司进行。测序结果判读标准：①具有已知的致病性 1.3 统计学方法
突变：P286R、V411L、S297F、S459F、A456P、F367S、 采用SPSS 23.0软件进行统计分析。计量资料
M444K、L424I、M295R、P436R、D368Y的样本判读为 采用均数±标准差（x ± s）表示，两组间差异比较采用

Molecular classification of
endometrial carcinoma

POLE pathogenic mutation POLE wild⁃type/non⁃pathogenic mutation

Absence of one or more No loss of MMR protein
MMR proteins/MSI⁃H expression/MSS

p53 protein normal/ p53 protein abnormal/
TP53 wild⁃type TP53 mutated
POLEmut subtype
dMMR subtype NSMP subtype p53abn subtype
图1 分子分型判读流程
Figure 1 Interpretation workflow for molecular classification