Page 30 - 南京医科大学自然版

第46卷第7期
·976 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2026年7月

并转移到硝酸纤维素膜上，然后用 5%脱脂牛奶封 均无统计学意义（P均>0.05）。与麻醉诱导前相比，
闭。将膜与针对抗 Drp1（1∶1 000）、p⁃Ser637⁃Drp1 非 POCD 组和 POCD 组老年患者手术结束后 1 d 白
（1∶1 000）、p⁃Ser616⁃Drp1（1∶1 000）、AMPK（1∶1 000）， 细胞线粒体膜呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性均显
p⁃AMPK（1∶100）、β ⁃ 肌 动 蛋 白（1∶10 000）和 著降低（P < 0.01），并且非POCD组白细胞线粒体膜
COX Ⅳ（1∶1 000）一抗在 4 ℃下孵育过夜。在室温 呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性显著高于 POCD 组
下将膜在辣根过氧化物酶偶联的兔IgG（1∶5 000）二 （P < 0.01，图 1），提示线粒体损伤可能参与 BPV 诱
抗中孵育 2 h。用 TBST 缓冲液反复洗涤后，通过 导的认知障碍。
ECL 试剂盒的化学发光试剂对条带进行显影并由 2.2 BPV麻醉后老年小鼠海马中Drp1激活情况
VersaDoc 4000MP 系统捕获图像，条带密度用自带 蛋白质印迹分析显示，与基线相比，BPV 麻醉
Quantity One软件分析。 后第1、3、5天小鼠海马中p⁃Ser637⁃Drp1的水平显著
1.2.10 钙调神经磷酸酶活性测定 降低（P < 0.05），并在BPV麻醉后第7天恢复到基础
使用比色钙调神经磷酸酶细胞活性测定试剂盒 水平。相比之下，p⁃Ser616⁃Drp1和总Drp1水平在7 d
制备神经元裂解物并测试钙调神经酶活性。将测定 内差异无统计学意义。分析线粒体蛋白提取物表
的吸光度值转换为钙调神经磷酸酶释放的磷酸盐 明，与基线相比，BPV麻醉后第1、3天小鼠海马中位
量。测量结果均标准化为每个样本的蛋白质浓度。 于线粒体的 mito⁃Drp1 水平显著增加（P < 0.05），并

1.3 统计学方法 且直到麻醉后第5天才恢复（图2）。
使用 SPSS 22.0 统计软件包进行数据分析。实 2.3 BPV暴露诱导原代神经元Drp1活化
验定量数据表示为均值±标准差（x ± s）。多组间的 与Control 组相比，BPV暴露6 h、12 h、24 h后检
比较使用单因素方差分析（ANOVA），两两比较采用 测到神经元中 p⁃Ser637⁃Drp1 蛋白表达显著减少
事后Tukey法多重比较。重复测量数据采用重复测 （P < 0.05），以及位于线粒体的mito⁃Drp1蛋白水平显
量方差分析。P < 0.05为差异有统计学意义。 著增加（P < 0.05）。p⁃Ser616⁃Drp1 和总 Drp1 水平在
BPV暴露24 h期间无显著变化（图3）。
2 结 果
2.4 钙调神经磷酸酶介导的Drp1激活对原代神经
2.1 患者外周血白细胞线粒体膜呼吸链复合体活 元BPV刺激的反应
性分析 与 Con 组相比，BPV 组原代神经元中 p⁃AMPK、
非 POCD 组和 POCD 组老年患者麻醉诱导前白 mito⁃Drp1 蛋白水平和钙调神经磷酸酶显著增加
细胞线粒体膜呼吸链复合体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ活性差异 （P < 0.05），p⁃Ser637⁃Drp1 蛋白水平显著降低（P <

A Non⁃POCD B Non⁃POCD C Non⁃POCD D Non⁃POCD
POCD POCD POCD POCD
P<0.001
P<0.001
Ⅰ 10 P<0.001 P=0.003 Ⅱ 400 P<0.001 Ⅲ 25 P=0.002 P=0.004 Ⅳ 60 P<0.001 P=0.003
P<0.001
P<0.001
Activity level of mitochondrial membrane respiratory chain complex 8 6 4 2 0 Activity level of mitochondrial membrane respiratory chain complex 300 0 P=0.005 Activity level of mitochondrial membrane respiratory chain complex 20 5 0 Activity level of mitochondrial membrane respiratory chain complex 40 0
15
200
10
20
100
Before
Operation
Before
Operation
Operation
Operation
Before
Before
1 d
anesthesia
1 d
anesthesia
1 d
anesthesia
1 d
anesthesia
A：Activities of leukocyte mitochondrial respiratory chain complexes Ⅰ in the POCD and non⁃POCD groups. B：Activities of leukocyte mitochondri⁃
al respiratory chain complexes Ⅱ in the POCD and non⁃POCD groups. C：Activities of leukocyte mitochondrial respiratory chain complexes Ⅲ in the
POCD and non⁃POCD groups. D：Activities of leukocyte mitochondrial respiratory chain complexes Ⅳ in the POCD and non⁃POCD groups.（POCD
group：n=15，non⁃POCD group：n=46）.
图1 非POCD组和POCD组老年患者麻醉诱导前白细胞线粒体膜呼吸链复合体活性比较
Figure 1 Comparison of the activities of the respiratory chain complexes in leukocyte mitochondria of elderly patients in the
non⁃POCD group and the POCD group before anesthesia induction