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第46卷第9期
·1320 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2026年9月

WT 对照明显增多（图3C、D）。上述结果一致表明， 高度一致（图 4D），提示 Notch 信号通路可能介导了
Pin1 敲除解除了对 C17.2 NSC 的分裂限制，显著增 Pin1缺失引起的增殖表型。
强了其增殖能力。 2.5 Pin1通过负向调控Notch1通路抑制NSC增殖
2.4 Pin1 -/- NSC的转录组学分析 为确证 Pin1 敲除引起的增殖增强是否依赖于
为了探究Pin1影响NSC增殖能力的分子机制， Notch 信号通路的激活，进一步开展回补实验。使
对 WT 型和 Pin1 敲除型 C17.2 NSC 分别进行了转录 用了γ⁃分泌酶抑制剂DAPT处理细胞，DAPT能够特
组测序（RNA sequencing，RNA⁃seq）。测序结果显 异性抑制γ⁃分泌酶的活性，从而阻断 Notch 受体胞

示，共检测到 41 097 个基因表达。按照|log2 （fold 内段（Notch intracellular domain，NICD）的剪切与释
change）|≥1，Padj≤0.05 的标准，共筛选出 1 215 个 放，抑制 Notch 信号通路的向下游传递。Western
DEG，其中上调基因 359 个，下调基因 856 个（图 blot 结果显示，相比 WT 组，Pin1 NSC 中 Notch1 受
-/-
4A）。KEGG 信号通路富集分析显示，Notch 信号通 体蛋白水平显著升高（图 5）。DAPT 处理后 Pin1 -/-
路在差异基因中显著富集（图 4B）。聚类热图进一 NSC 中 Hes1 基因表达下降，Notch1 蛋白的高表达被
步展示了Notch通路相关基因在两组间的表达差异 有效逆转，且Ki67阳性细胞比例也显著下降。这一
（图 4C）。qRT⁃PCR 验证结果显示，Ramp1、Mmp2、 结果证实，Pin1敲除导致的NSC异常增殖是通过过
Hes1、Notch3、Rictor 等基因的表达趋势与测序结果 度激活Notch1信号通路实现的，即Pin1在生理状态

A B
Neuroactive ligand⁃receptor interaction
Neurotrophin signaling pathway -lg P
Notch signaling pathway
200 NF⁃kappa B signaling pathway 3
Down⁃regulated Axon guidance
2
P Not⁃significant Cell adhesion molecules
-lg Up⁃regulated PI3K⁃Akt signaling pathway 1
JAK⁃STAT signaling pathway
100
Rap1 signaling pathway
Ubiquitin mediated proteolysis
Count
RNA degradation
10
Ribosome biogenesis in eukaryotes
0 Ferroptosis 20
Hippo signaling pathway⁃multiple species 30
-10 -5 0 5 10
log2 FC Necroptosis
0 0.05 0.10
Gene ratio
C Pin1 -/- WT D WT
Notch3 2.0 Pin1 -/-
Hes1 ***
Aph1b 3 1.5 ** ** **
Dtx3l **
Notch1 1.5 Relative mRNA expression levels 1.0
Notch2 0
Hes5 -1.5
Hey1 -3 0.5
Jag1
Notch4 0
Dll1 Alcam Mmp2 Rictor Hes1 Notch3
Hes2
Dll3
Hes7
Maml3
Maml1
Jag2
Hes6
Hes3
Dll4
-/-
A：Volcano plot of the RNA⁃seq data. B：KEGG pathway enrichment analysis of differentially expressed genes in the Pin1 NSC. C：Heat map of
**
***
differentially expressed genes. D：qRT⁃PCR validation of differentially expressed genes（n=3）. P < 0.01， P < 0.001.
图4 Pin1 NSC的转录组学分析
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-/-
Figure 4 Transcriptomic analysis of Pin1 NSCs