Page 34 - 南京医科大学学报自然科学版
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第42卷第1期
               · 28  ·                           南 京    医 科 大 学 学         报        阴性对照组           2022年1月


                                                                    5
                                                                                   Caspase抑制剂+H2O2组
                                        阴性对照组 H2O2组 Caspase抑制剂+H2O2组  4 3   *  *&  H2O2组  *



                          Cleaved⁃Caspase 3       25 kDa          蛋白相对表达量  2               *&
                            Cleaved⁃PARP          112 kDa
                                                                    1
                                 β⁃actin          32 kDa
                                                                    0
                                                                      Cleaved⁃Caspase 3  Cleaved⁃PARP

                                         与阴性对照组相比，P < 0.05；与H2O2组相比，P < 0.05（n=5）。
                                                                        &
                                                       *
                                                  图5   各组凋亡相关蛋白的表达
                                  Figure 5 Expression of apoptosis⁃related proteins in each group of spesis

                          50                                    细胞中的ROS维持在较低水平，对肾小管和肾微循
                         （ % ）  40  *  *&      #&               环的生理调节有作用           ［15］ ；脓毒症时，在各种炎症因
                                                                子的刺激下，肾小管和肾血管中 ROS 生成增强，同
                         细胞周期G1期比例  30                          时谷胱甘肽（glutathione，GSH）等抗氧化物减少，

                                                                ROS 攻击肾小管细胞导致膜损伤及线粒体超氧阴
                          20
                                                                离子渗漏，随着细胞中 ROS 浓度的进一步增加，最
                          10
                                                                终引起脓毒症肾损伤           ［16］ 。以氧化应激损伤为靶点
                           0                                    的治疗已经成为近年来脓毒症的研究热点。本研
                          空白对照组 阴性对照组  H2O2组 Caspase抑制剂+H2O2组   究发现，用LPS刺激肾小管上皮细胞后，细胞ROS水
                                     Caspase抑制剂组

                                                                平明显较正常肾小管上皮细胞升高，提示脓毒症时


                                                                高。本研究用H2O2处理细胞，ROS检测显示H2O2引
                 与空白对照组相比，P < 0.05；与阴性对照组相比，P < 0.05；与H2O2组     肾小管细胞的氧化应激水平较生理状态异常升
                                                &
                             *
              相比，P < 0.05（n=5）。                                 起了细胞更高水平的氧化应激损伤，结果显示，与
                  #
                            图6 各组细胞G1期比例                        未经H2O2处理的脓毒症细胞模型相比，H2O2组细胞
                   Figure 6 Proportion of G1 phase cells in each group
                                                                的增殖率降低，凋亡率升高，同时发生了细胞周期
              官衰竭，AKI是最常见的并发症之一，是脓毒症患者                          的G1期阻滞。结合文献报告和本研究结果，我们更
              死亡的独立危险因素 ，寻找脓毒症急性肾损伤的                            倾向于认为 ROS 对脓毒症肾小管上皮细胞有抑制
                                 ［2］
              特异性标志物和有效的防治策略刻不容缓。                               增殖和周期进展，诱导凋亡的作用，这与文献中以
                  氧化应激损伤是脓毒症组织器官损伤的重要                           缓解氧化应激作为脓毒症肾损伤治疗的理论依据
              机制，且氧化应激和脓毒症全身和局部持续性炎症                            相吻合。
              反应之间存在密切关联。病原体及其释放的毒素                                  Caspase 是一类半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白
              激活炎症反应及宿主释放炎症介质会影响氧化呼                             酶，存在于胞质中，线粒体途径细胞凋亡的本质是
              吸链的偶联过程，引起线粒体损伤和功能障碍，最                            Caspase 依赖的蛋白酶级联反应           ［17］ 。本研究重点关
              终导致组织、器官损伤。脓毒症大鼠肺组织超氧化                            注的正是 ROS 与线粒体途径的细胞凋亡。有研究
              物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）活性降低，诱              发现，肿瘤细胞高表达 Caspase⁃3/7，能破坏线粒体
              导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，         膜电位和上调 ROS 水平，诱导细胞凋亡，ROS 抑制
              iNOS）活性升高     ［12］ 。产生的大量 iNOS 源性一氧化              剂能逆转这种效应          ［18］ 。原代大鼠软骨细胞中过高
              氮对心肌细胞也有毒性作用，能抑制心肌产生ATP，                          水平的ROS能引起细胞色素c和Caspase⁃3高表达，
              引起心肌收缩障碍，最终导致脓毒症心力衰竭                       ［13］ 。  促进细胞凋亡       ［19］ 。本研究用 Caspase 抑制剂 Ac⁃
              氧化应激也会对肾组织造成损伤，线粒体是肾实质                            DEVD⁃CHO 联合 H2O2处理脓毒症肾小管上皮细胞
              细胞ROS的主要产生部位           ［14］ 。生理条件下，肾实质            模型，结果发现，细胞ROS水平较H2O2组降低，但仍
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