Page 18 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第2期
·164 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2022年2月

—300 kDa
DMEM IL⁃17 siCTR+IL⁃17 siIL⁃17RA+IL⁃17 p300 pcDNA3.1 pcDNA3.1/p300
β⁃actin
—42 kDa
p300 —300 kDa
MMP2 —74 kDa
shCTR shp300⁃1 shp300⁃2 shp300⁃3
β⁃actin —42 kDa
p300 —300 kDa
3 p300 β⁃actin
* —42 kDa
MMP2 * 将 pcDNA3.1/p300 转染 H1299 细胞 48 h，p300 蛋白表达明显增
蛋白相对表达量 2 ▲ ▲ 加，而将 shp300 转染 48 h 时再用 IL⁃17（50 ng/mL）刺激 3 h，可见

shp300⁃2处理的细胞p300的表达量显著减少。
图5
Western blot检测pcDNA3.1/p300和shp300质粒表达
1
的验证
Figure 5 Expression verification of pcDNA3.1/p300 and
0
DMEM IL⁃17 siCTR+IL⁃17 shp300 plasmids by Western blot
siIL⁃17RA+IL⁃17
将 siIL⁃17RA 转染 H1299 细胞 48 h，再用 IL⁃17（50 ng/mL）刺激 激活因子和靶分子的表达紧密相关 ［10⁃11］ 。本研究测
3 h。与DMEM组比较，P < 0.01；与siCTR+IL⁃17（50 ng/mL）组比较， 定受 IL⁃17 刺激的 H1299 细胞内一些因子变化后发
*
P < 0.01（n=3）。 现，转录辅激活因子 p300 和 MMP2 的表达明显上
▲
图 4 Western blot 检测敲低 IL⁃17RA 影响 p300 和 MMP2
调，且两者的表达时相基本一致。提示 p300 和
的表达
Figure 4 IL ⁃ 17RA knockdown affects p300 and MMP2 MMP2升高之间可能存在某种联系。
expression by Western blot 已知 p300 是一含有多个功能结构域的蛋白分

A B
pcDNA3.1 pcDNA3.1/p300 shCTR+IL⁃17 shp300+IL⁃17 80
（ % ） 60 *
细胞愈合率 20
0 h 40 ▲

0
pcDNA3.1 shCTR+IL⁃17
shp300+IL⁃17
pcDNA3.1/p300
h
24

B
pcDNA3.1 pcDNA3.1/p300 shCTR+IL⁃17 shp300+IL⁃17 迁移
侵袭
4
*
h 3 *
迁移24 细胞比例 2 ▲ ▲
1
0
shCTR+IL⁃17
h pcDNA3.1
24 pcDNA3.1/p300 shp300+IL⁃17
侵袭

转染pcDNA3.1/p300组24 h时，细胞迁移与侵袭能力明显升高，而shp300+IL⁃17组的细胞迁移及侵袭能力则显著下降。A：划痕实验代表
图片（×40）及半定量分析柱形图；B：Transwell实验代表图片（×100）及半定量分析柱形图。与pcDNA3.1组比较，P < 0.01；与shCTR+IL⁃17组比
*
较，P < 0.01（n=3）。
▲
图6 过表达和敲低p300影响细胞的迁移与侵袭
Figure 6 Effects of p300 overexpression and knockdown on cell migration and invasion