Page 23 - 南京医科大学学报自然科学版

第42卷第2期 焦国庆，李明秋，吴 莹，等. PI3K/Akt调控糖尿病冠状动脉平滑肌细胞BK通道的作用机制［J］.
2022年2月 南京医科大学学报（自然科学版），2022，42（02）：166-170，199 ·169 ·

达量增高（P < 0.05，图3）。 A * *
100 NG
HG
GKT（-） GKT（+） HG+GKT
（ % ）
DNA⁃Pkcs 80
460 kDa
ROS水平
Akt 56 kDa 60
p⁃Akt 56 kDa 40
28 kDa 20
BK⁃β1
GAPDH 36 kDa 0
B
GKT（-） 100
GKT（+） 80
蛋白相对表达量 3.0 * * * * （ % ） ROS水平 60 *
4.0

2.0
40
1.0
20
0.0
DNA⁃Pkcs Akt p⁃Akt BK⁃β1
GKT137831（20 μmol/L）和对照组 0.1%（w/w）的二甲基亚砜 0 DM DM+GKT
（DMSO）作用于15 mmol/L糖浓度下的HCASMC 48 h，与正常对照组 A：5 mmol/L糖浓度（NG）、15 mmol/L糖浓度（HG）、15 mmol/L糖
比较，P < 0.05（n=3）。 浓度+GKT137831（HG+GKT）状态下 HCASMC 细胞中 ROS 的表达，
*
图3 Western blot检测GKT137831作用HCASMC 48 h后 两组比较，P < 0.05（n=3）。；B：STZ诱导的糖尿病大鼠经GKT137831
*
BK⁃β1、DNA⁃Pkcs、Akt、p⁃Akt的表达 灌胃（DM+GKT 组）2 周后，和未经 GKT137831 处理组（DM 组）相比
*
*
Figure 3 Expression of BK⁃β1，DNA⁃Pkcs，Akt and p⁃Akt 较，P < 0.05（n=3）。与DM组比较，P < 0.05（n=3）。
（S473）of human coronary artery smooth mus⁃ 图 4 GKT137831 对 HCASMC 及糖尿病大鼠冠状动脉
cle cells after treated with ROS inhibitor ROS的影响
GKT137831 for 48 h by Western blot Figure 4 ROS Expression of human coronary artery
2.4 GKT137831 对 HCASMC 及大鼠冠状动脉中 smooth muscle cells and coronary artery from
STZ induced diabetic rats treated with
ROS的影响
GKT137831
DCFH⁃DA 进入细胞，容易被细胞内酯水解 将
ES 转化为非荧光形式的 DCFH，在多种 ROS 存在下
3 讨 论
迅速转化为荧光 DCF。15 mmol/L 葡萄糖浓度下的
HCASMC 中 ROS 明显高于 5 mmol/L 葡萄糖浓度 BK通道是大电导钙激活钾通道的一种，广泛存
（P < 0.05）。经GKT137831处理48 h后，和15 mmol/L 在于人体的组织细胞和血管平滑肌细胞中，BK通道
葡萄糖浓度组相比，GKT137831 处理后的 HCASMC 调节着血管张力，与血管的血流有关。BK通道电流
中 ROS 含量降低约 40%（P < 0.05）。STZ 诱导的糖 约占冠状动脉平滑肌细胞总钾离子电流的65％，是
尿病大鼠经 GKT137831 灌胃 2 周后，冠状动脉中 冠状动脉平滑肌细胞上最主要的钾通道，在糖尿病
ROS 含量较未经 GKT137831 处理组降低 40%（P < 等疾病状态下，冠状动脉平滑肌细胞 BK 通道开放
0.05，图4）。 减少，电流密度降低，蛋白表达减弱，BK通道功能障

2.5 大鼠冠状动脉BK⁃β1、DNA⁃Pkcs、Akt、p⁃Akt的 碍，可能是冠状动脉功能受损的最主要原因 ［10］ ，因
表达 此，积极寻求糖尿病状态下 BK 通道蛋白表达减少
和正常大鼠相比较，STZ 糖尿病模型大鼠冠状 及功能障碍的原因，对糖尿病状态下冠状动脉疾病
动脉 DNA⁃Pkcs、Akt、p⁃Akt（S473）表达量分别增加 的防治，具有重大临床意义。
约 50%、30%、30%（P < 0.05），BK⁃β1 表达量降低约 高糖状态可上调SOD 的水平，导致细胞内ROS

45%（P < 0.05）；和糖尿病大鼠相比较，GKT137831 显著增加。超氧阴离子自由基和NO反应产生的过
喂饲2周后的糖尿病大鼠冠状动脉DNA⁃Pkcs、Akt、 氧化亚硝基（OONO）可抑制大鼠大脑动脉血管平滑
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p⁃Akt（S473）蛋白表达量明显降低（P < 0.05）、BK⁃β1 肌细胞膜上的BK通道 ［11］ 。本课题组以前的研究证
表达量明显增高接近于正常大鼠水平（P < 0.05， 实，高糖（22 mmol/L）状态下，转染表达钙激活钾离
图 5）。 子通道（hSlo）的 HEK293 细胞及 HCASMC 中，BK 通