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第43卷第3期 阮玉婷，李 雅，葛 文，等. LINC01518对IL⁃17诱导非小细胞肺癌细胞增殖的影响［J］.
2023年3月 南京医科大学学报（自然科学版），2023，43（3）：304-310 ·307 ·

24 h，两种细胞的增殖水平均已升高，48 h以后均较 殖效应的 LncRNA ［7-18］ ，先行 RT⁃PCR 验证。结果显
显著（图1C、D）。 示 ，IL ⁃ 17 刺 激 两 细 胞 后 不 同 时 间 ，LINC01518、
2.3 IL⁃17 刺激 H1299 和 PC9 细胞后能显著升高 LINC00265 和 PSMA3 ⁃ AS1 表 达 升 高 明 显（图
LINC01518的表达水平 2A~D）。Real⁃time PCR进一步检查前述3个升高的
为了验证 IL⁃17 刺激 H1299 和 PC9 细胞后上调 LncRNA 发现，IL⁃17 刺激 2 h 和 3 h 时，LINC01518、
的 LncRNA，从前期 LncRNA 芯片上调 2 倍以上的 LINC00265 及 PSMA3 ⁃ AS1 均 显 著 上 升 ，其 中
459 个 LncRNA 中，选取了 10 个文献已报道有促增 LINC01518升高得更为明显，且以H1299细胞较为显

A B 3 ** C DMEM组 D DMEM组
BEAS⁃2B H1299 H1975 ** * nm ） 2.0 IL⁃17刺激组 ** 2.0 IL⁃17刺激组 **
PC9
IL⁃17RA 蛋白相对表达量 2 1.5 ** ** 1.5 ** **
IL⁃17RA 96 kDa 1 （ 450 1.0 * （ 450 nm ） 1.0
β⁃actin 42 kDa 0 D 0.5 0 D 0.5 0
BEAS⁃2B PC9 H1299 H1975 0 24 时间（h） 72 96 0 24 时间（h） 72 96
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A、B：Western blot显示，BEAS⁃2B、PC9、H1299和H1975细胞系均有IL⁃17RA的表达，H1299和PC9细胞表达较多。A：电泳条带；B：蛋白表
达的半定量分析（与BEAS⁃2B比较，P < 0.05，P < 0.01）。C、D：IL⁃17刺激H1299（C）和PC9（D）细胞不同时间，CCK⁃8结果显示，IL⁃17刺激后
*
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24 h，两种细胞的增殖均增强（与DMEM组比较，P < 0.05，P < 0.01，n=3）。
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图1 NSCLC细胞系IL⁃17RA表达和IL⁃17刺激H1299和PC9细胞不同时间后细胞增殖水平的变化
Figure 1 The expression of IL⁃17RA in NSCLC cell lines and the changes of H1299 and PC9 cell proliferation stimulated
with IL⁃I7 for different times

著（图2E、F），故此后选择H1299细胞继续开展实验。 因后，由 IL⁃17 诱导进入增殖期的细胞数未见明显
2.4 LINC01518 过表达和小干扰质粒的鉴定、表达 升高（图 4B、C）。此外，细胞克隆形成实验发现，过
及干扰效率的验证 表达 LINC01518 基因 8 d 时，细胞克隆数明显增加，
为了探讨 LINC01518 在 IL⁃17 诱导 H1299 细胞 而沉默LINC01518基因后8 d，由IL⁃17诱导的细胞克
增殖中的作用，先构建了 LINC01518 过表达和小干 隆形成数则未见增多（图 4D、E）。上述结果表明，
扰质粒。测序鉴定成功后（图 3A、B），将 pcDNA3.1/ IL⁃17刺激H1299细胞后可通过上调LINC01518的表
LINC01518 质粒转染 H1299 细胞 48 h，行 Real⁃time 达促进H1299细胞的增殖。
PCR检测，结果显示转染pcDNA3.1/LINC01518的细
3 讨 论
胞中，LINC01518 的表达显著增加（图 3C）。此外，
转染 shLINC01518⁃1~3 小干扰质粒 48 h 再行 IL⁃17 本课题组以往研究表明，NSCLC癌组织中IL⁃17
刺激 3 h 发现，shLINC01518⁃1 能显著抑制 IL⁃17 上 表达明显升高，且用 IL⁃17 刺激 NSCLC 细胞后能诱
调的LINC01518的表达（图3D），提示shLINC01518⁃1 导其增殖，相应机制涉及 HMGA1 上调可致 cyclin
沉默效率最佳，故选取 shLINC01518⁃1 进行后续实 D1基因的转录与表达 。不过，由于NSCLC细胞增
［6］
验，并统一命名为shLINC01518。 殖的机制较为复杂，故深入研究癌细胞异常增殖的
2.5 LINC01518 基 因 表 达 能 促 进 IL ⁃ 17 诱 导 的 原因及其分子调控机制十分必要。
H1299细胞增殖 已知细胞因子刺激细胞发挥效应的前提是其
为了进一步检查LINC01518对H1299细胞增殖 细胞表面含有相应的受体 ，故本研究一开始就检测
［6］
的影响，在细胞转染 pcDNA3.1/LINC01518 质粒和 了 NSCLC 细胞系 IL⁃17RA 的表达水平。在证实了
shLINC01518 质粒后进行了相应的实验。CCK⁃8 实 PC9、H1299和H1975细胞系IL⁃17RA的表达均高于
验表明，pcDNA3.1/LINC01518 转染组，48 h 时细胞 正常支气管上皮细胞BEAS⁃2B后，又选择了IL⁃17RA
增殖水平明显升高，而沉默 LINC01518 基因后由 表达较高的PC9和H1299细胞，用定量IL⁃17刺激不

IL⁃17诱导的细胞增殖未见增加（图4A）。同时，EdU 同时间行 CCK⁃8 实验，确证两种细胞受 IL⁃17 刺激
实验显示，pcDNA3.1/LINC01518 转染 48 h 时，进入 24 h 时，增殖水平已明显升高，48 h以后更加显著。
增殖期的细胞数明显增多，而沉默 shLINC01518 基 为了探讨 IL⁃17 刺激 NSCLC 细胞诱导其增殖