Page 13 - 南京医科大学自然版

第44卷第12期 程 丽，倪 曼，王 洁，等. 环磷酰胺对卵母细胞发育潜能影响的研究［J］.
2024年12月 南京医科大学学报（自然科学版），2024，44（12）：1621-1628，1648 ·1627 ·

A Mock Ctrl 4⁃HC B

150 * *
Relative fluorescence intensity of DNMT3A 50
DAPI 100

25 μm 25 μm 25 μm
0
Mock Ctrl 4⁃HC

DNMT3A

25 μm 25 μm 25 μm

Merge

25 μm 25 μm 25 μm

A：Increased expression of DNMT3A in MⅡ oocytes treated with 1.0 μmol/L 4⁃HC（scale bar=25 μm）. B：Semi⁃quantitative results of DNMT3A
*
immunofluorescence. P < 0.05（n=20）.
图6 1.0 μmol/L 4⁃HC作用下MⅡ期卵母细胞DNMT3A表达水平
Figure 6 DNMT3A expression levels in MⅡ⁃stage oocytes treated with 1.0 μmol/L 4⁃HC

ROS 含量上升，从而削弱抗氧化能力，导致氧化应 DNMT3A 和 DNMT3B 是在胚胎发育中建立 DNA 甲
激的发生。进一步的线粒体膜电位检测实验发现， 基化的主要酶 ［21］ 。先前研究发现，CTX 早期作用会
4⁃HC还可引发卵母细胞线粒体膜电位的下降，这提 导致后代卵母细胞中H19、Igf2r和Peg3e等印记基因
示4⁃HC诱导的氧化应激可能已造成线粒体损伤，而 的甲基化水平异常 ［15，22-23］ ，并下调多种转录因子 ［17］ ，
受损的线粒体会进一步导致ROS泄漏 ［17］ ，形成恶性 从而影响卵母细胞的表观遗传。一些研究还观察
循环，最终影响卵母细胞的能量生成，降低其后续 到，在环磷酰胺作用下，尽管仍有卵母细胞存活，
［18］
发育潜能 。 但这些存活卵母细胞的表观遗传受到了影响，如
多细胞生物从受精卵发育而来，依赖于组织和 Dnmt1表达下降，并同时影响了卵母细胞受精后胚
细胞特异性转录程序的时空调控，其中 DNA 甲基 胎的发育潜能 ［24-25］ 。因此，本研究重点讨论了 CTX
化过程是重要机制之一。DNA 甲基化指的是甲基 对卵母细胞 DNA 甲基化酶等表达的影响。结果显
（—CH3）基团与胞嘧啶（C）嘧啶环的 5⁃碳原子形成 示，在 CTX 作用下，卵丘颗粒细胞、受精卵和二细
共价键的过程，通常发生在鸟嘌呤（G）核苷酸与胞 胞胚胎中 Dnmt3a 表达水平升高。此外，卵母细胞
嘧啶核苷酸以磷酸键相连的胞嘧啶嘧啶环上，称为 的免疫荧光结果显示，4⁃HC 作用下，卵母细胞内
CpG 岛 ［19］ 。CpG 岛多位于基因的启动子和外显子 DNMT3A 蛋白表达增加，这提示，尽管部分受损的
区域，因而 DNA 甲基化可以通过影响启动子的读 卵母细胞仍能完成受精甚至发育至囊胚阶段，但这
取来调控 DNA 转录。在未甲基化的胞嘧啶中添 些细胞可能已经发生了表观遗传等长期改变。
加甲基称为从头甲基化，由 DNMT3 家族酶催化， 此外，本研究发现，4⁃HC 作用下卵母细胞受精
［20］
包括 DNMT3A、DNMT3B、DNMT3C 和 DNMT3L 。 后2⁃细胞形成率并未发生显著下降，但囊胚形成率