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第45卷第10期
·1436 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年10月
前列腺癌主要影响 45~60 岁的中年男性，是西 1.1.3 主要试剂
［1］
方国家导致癌症相关死亡的最主要原因 ，在亚 RPMI⁃1640 培养基、MEM 培养基、Ham’s F⁃12
太地区，前列腺癌的发病率和死亡率也正在迅速增 培养基、Opti⁃MEM 培养基、胎牛血清、青链霉素（武
［2］
加 。前列腺癌是一种异质性疾病，其发病与遗传、 汉普诺赛生命科技有限公司）；小干扰 RNA（small
种族、地区、外部环境因素、饮食习惯等均有关 。 interfering RNA，siRNA）、qRT⁃PCR 引物（苏州吉玛
［3］
大多数前列腺癌患者早期没有任何临床症状，其诊 基因股份有限公司）；Lipofectamine 3000（上海赛默
断方式主要为样本活检分析、前列腺特异性抗原检 飞世尔科技中国有限公司）；RNA Easy Fast试剂盒、
测、直肠指检、磁共振成像等 。近年来，越来越多 FastKing RT 试剂盒、Talent SYBR Green qPCR 试剂
［4］
的前列腺癌生物标志物被发现，对患者的早期诊断 盒（北京天根生化科技有限公司）；细胞裂解液、总
和特异性治疗提供了帮助。将癌症靶向治疗与生 蛋白提取试剂盒、BCA 蛋白检测试剂盒、Pro⁃light
物标志物相结合已成为一种有效的抗癌策略，其应 HRP 试剂盒、Triton X⁃100、牛血清白蛋白、4′，6⁃二
［5］
用数量也迅速增加 。 脒基⁃2⁃苯基吲哚（DAPI）、CCK⁃8 试剂盒、吉姆萨染
载脂蛋白 E（apolipoprotein E，APOE）是一种糖 色液、EdU 实验试剂盒（上海碧云天生物技术有限
基化分泌蛋白，主要负责脂蛋白的转化与代谢，参 公司）；APOE 抗体、β⁃actin 抗体、HRP 标记二抗
与调节许多生物学功能，如脂质稳态调节、胆固醇 （Abcam 公司，美国）；Transwell 小室（Sigma⁃Aldrich
［6］
运输、免疫调控和神经元修复再生等 。APOE与许 公司，美国）；第 2 代非甾体雄激素受体抑制剂阿帕
多神经疾病的发生有关，如阿尔茨海默病、黄斑变 鲁胺（徐州迈凯生物科技有限公司）。
性、视网膜变性等 。近年来 APOE 作为一种与癌 1.2 方法
［7］
症发生与转移密切相关的分子蛋白获得关注，很多 1.2.1 细胞培养
研究也聚焦于探索APOE 在癌症中的作用 。有研 3 种人前列腺癌细胞系 LNCap、DU145 和 PC⁃3
［8］
究表明，APOE 参与了结直肠癌的转移 ；在胃癌组 在南京医科大学第一附属医院实验室中培养和传
［9］
织中，APOE 的表达水平显著增高并与患者较差的 代，其中LNCap细胞培养于含有10%胎牛血清和1%
预后密切相关 ［10］ ；也有研究发现，抑制 APOE 的 青链霉素的 RPMI⁃1640 培养基中，DU145 细胞培养
mRNA 表达可减缓甲状腺癌的生长 ［11］ 。目前 APOE 于含有10%胎牛血清、1%青链霉素和非必需氨基酸
在前列腺癌进展中所扮演的角色尚不清楚。本研 的 MEM 培养基中，PC⁃3 细胞培养于含有 10%胎牛
究将使用前列腺癌细胞系和小鼠，探讨 APOE 的致 血清和 1%青链霉素的 Ham’s F⁃12 培养基中，培养
癌作用，为前列腺癌的发病机制、生物标志物和靶 箱温度均为 37 ℃，湿度 97%，含有 5% CO2。在显微
向治疗提供新的策略。 镜下观察细胞融合度达80%时进行传代培养。
1.2.2 细胞转染
1 材料和方法
在转染前 24 h，将3种人前列腺癌细胞系LNCap、
1.1 材料 DU145和PC⁃3置于6孔板中培养，当细胞生长至80%
1.1.1 实验细胞系 的融合度时进行转染。为了敲除APOE，使用siRNA
人前列腺癌细胞系LNCap、DU145和PC⁃3均购 （si⁃APOE#1、si⁃APOE#2、si⁃APOE#3）及其阴性对照
自武汉普诺赛生命科技有限公司。 （si⁃NC）转染细胞，序列如下，si⁃NC：5′⁃UUCUCCGAAC⁃
1.1.2 实验动物 GUGUCACGUTT⁃3′；si⁃APOE#1：5′⁃GACAUGUAC⁃
4~6周龄SPF级BALB/c雄性裸鼠（nu/nu）18只， CAAUGACGAUTT⁃3′；si⁃APOE#2：5′⁃GAGUUGAA⁃
体重（19.0±3.6）g，购自上海南方模式生物科技有限 GGCCUACAAAUTT⁃3′；si⁃APOE#3：5′⁃GUCACAUU⁃
公司。裸鼠全部定时饲养于南京医科大学第一附 CCUGGCAGGAUTT⁃3′。细胞转染使用 Lipofectamine
属医院 SPF 级动物实验室中。饲养条件为：温度 3000进行，将75 pmol的不同siRNA稀释在7.5 μL试
（22±3）℃，相对湿度 40%~70%，12 h/12 h 昼夜光暗 剂和 2 mL 生长培养基中，然后加入 250 μL Opti⁃MEM
交替，自由进食饮水。所有实验步骤均严格按照动 培养基并混合均匀。每孔加入约 50 μL 的混合物并
物实验指南进行操作。本研究已获得实验动物伦 在 37 ℃下培养 48 h后收细胞进行检测。
理委员会审批通过，遵循 3R 原则［许可证号：SYXK 1.2.3 核酸提取与qRT⁃PCR
（苏）2023⁃0029］。 使用 RNA Easy Fast 试剂盒从 3 种前列腺癌细
