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第45卷第3期         黎   燕，周克茹，季旻珺，等. 利用反向遗传学技术拯救重组H1N1 pdm09亚型流感病毒［J］.
                  2025年3月                     南京医科大学学报（自然科学版），2025，45（3）：319-326                        ·325 ·


                或“有毒”，且与基因片段两端的非编码区有关                     ［18］ 。  Medical University（Natural Sciences）are all affiliated with
                本研究将 A/Wisconsin/588/2019 的 HA 全长 cDNA 导          Nanjing Medical University，but the review decision process is
                入双向表达载体pHW2000，转化至多种感受态细胞                         handled by independent reviewers and the editorial team，unaf⁃
                后均出现感受态细胞生长极其缓慢的情况。报道                             fected by institutional affiliation.
                                                                      作者贡献声明：
                的几种方法可改善这一状况，包括替换感受态，使
                                                                      黎燕参与研究设计、数据处理，完成初稿；周克茹参与文
                用重组缺陷的大肠杆菌来繁殖质粒                ［18］ ，在低温（25~
                                                                  章修改和润色；季旻珺参与文章修改；王桂芹负责选题，文章
                32°C）下培养转化的大肠杆菌            ［19］ ，或者对 pHW2000
                                                                  写作和修改。
                                                 ［20］
                质粒进行改造以减少有毒基因的表达 。有报道称                                Author’s Contributions：
                某些IAV非编码区互换不影响病毒增殖且能提高病                               LI Yan designed experiments，processed the data and com⁃
                毒复制效率，因此本研究尝试将不稳定的 HA 片段                          pleted the first draft；ZHOU Keru revised and polished this arti⁃

                非编码区替换为同为 IAV 进化树 B6 进化分支的 A/                     cle；JI Minjun revised this article；WANG Guiqin was responsi⁃
                California/07/2009 的非编码区  ［21］ ，发现转化至 Stbl3       ble for selecting topics，writing，and revising the manuscript
                感受态细胞后能正常生长，与上述其他方法相比，                           ［参考文献］
                本方法耗时少、成本低，为不稳定病毒基因的反向
                                                                 ［1］ HUANG W J，LI X Y，TAN M J，et al. Epidemiological
                遗传质粒构建提供了新方法。
                                                                      and virological surveillance of seasonal influenza viruses ⁃
                    病毒拯救过程中存在诸多影响因素，如质粒纯                              China，2020-2021［J］. China CDC Wkly，2021，3（44）：
                度、细胞状态、转染操作等。本研究为提高病毒拯                                918-922
                救效率，将重组质粒共转染 293T 细胞和 MDCK 细                     ［2］ NUWARDA R F，ALHARBI A A，KAYSER V. An over⁃
                胞，其中 293T 细胞用于产生病毒蛋白和 RNA 并包                           view of influenza viruses and vaccines［J］. Vaccines，
                装病毒，而MDCK 细胞作为扩增流感病毒的理想细                               2021，9（9）：1032
                胞系可使被拯救病毒粒子高效增殖。本研究所拯                            ［3］ LI X L，GU M，ZHENG Q M，et al. Packaging signal of in⁃
                救重组病毒的6个内部基因来自无法在人体内复制                                 fluenza A virus［J］. Virol J，2021，18（1）：36
                                                                 ［4］ DADONAITE B，GILBERTSON B，KNIGHT M L，et al.
                的毒株PR8，大量数据表明这种“6+2”模式的重组病
                                                                       The structure of the influenza A virus genome［J］. Nat
                毒对人体健康造成危害的概率很低                 ［22］ 。本研究参
                                                                       Microbiol，2019，4（11）：1781-1789
                照 WHO 实验室生物安全手册的规定               ［23］ ，所有病毒
                                                                 ［5］ FODOR E，TEVELTHUIS A J W. Structure and function
                相关实验操作全程在 BSL⁃2 实验室进行。WHO 建                            of the influenza virus transcription and replication ma⁃
                议，对于非H5或H7的重组病毒疫苗株，应做的安全                               chinery［J］. Cold Spring Harb Perspect Med，2020，10
                性评估包括基因测序、是否在雪貂体内减毒以及连                                （9）：a038398
                续传代后的遗传稳定性。雪貂是预测流感病毒对                            ［6］ HARRINGTON W N，KACKOS C M，WEBBY R J. The
                人体致病性的最佳动物模型，但由于条件限制本研                                 evolution and future of influenza pandemic prepared⁃
                究并未使用雪貂测试重组病毒的致病性。后续将                                  ness［J］. Exp Mol Med，2021，53（5）：737-749
                尝试在细胞或鸡胚连续传代培养重组病毒，完善对                           ［7］ HAAS K M，MCGREGOR M J，BOUHADDOU M，et al.
                                                                      Proteomic and genetic analyses of influenza A viruses
                其致病性及稳定性的评价。
                                                                      identify pan⁃viral host targets［J］. Nat Commun，2023，14
                    综上所述，本研究成功拯救一株重组 H1N1
                                                                      （1）：6030
                pdm09 病毒，该重组病毒在 MDCK 细胞和鸡胚上表
                                                                 ［8］ LI Z Q，ZHONG L P，HE J，et al. Development and appli⁃
                现出良好的适应性，并且对小鼠有致病性，提示无                                 cation of reverse genetic technology for the influenza
                生长缺陷及毒力缺陷。本研究为反向遗传学技术                                  virus［J］. Virus Genes，2021，57（2）：151-163
                快速拯救流感病毒提供了新思路。                                  ［9］ XIE X P，LOKUGAMAGE K G，ZHANG X W，et al. Engi⁃
                   利益冲突声明：                                             neering SARS⁃CoV⁃2 using a reverse genetic system［J］.
                   所有作者声明无利益冲突，作者黎燕和季旻珺与期刊出                            Nat Protoc，2021，16（3）：1761-1784
                版部同隶属南京医科大学，但审稿决策由独立审稿人和编辑                       ［10］ROCKMAN S，LAURIE K，BARR I. Pandemic influenza
                团队负责，未受机构隶属关系的影响。                                      vaccines：what did we learn from the 2009 pandemic and
                   Conflict of Interests：                              are we better prepared now?［J］. Vaccines，2020，8（2）：
                   All authors declare no conflict of interest. LI Yan，JI Min⁃  211
                jun and the publication department of the Journal of Nanjing  ［11］WEI C J，CRANK M C，SHIVER J，et al. Next⁃generation
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