Page 32 - 南京医科大学自然版

第45卷第6期
·770 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2025年6月

A B iNOS DAPI Merge
Coronal pulp

Root pulp
Root pulp Coronal pulp
50 μm
HE C IL⁃1β DAPI Merge
Coronal pulp
100 μm 100 μm

（IL⁃1β）

IHC Root pulp
100 μm 100 μm
50 μm
A：HE staining and immunohistochemical staining of IL⁃β in human dental pulp. B，C：Immunofluorescence staining of inflammatory factors in
human dental pulp.
图1 人炎症牙髓中炎症因子的表达
Figure 1 Expression of inflammatory factors in human dental pulp

增加。
1.5
Control
2.5 BA 对 THP⁃1 来源 M1 巨噬细胞炎症的抑制作
12.5 μmol/L BA 用与自噬激活有关
Cell viability 1.0 50.0 μmol/L BA 采用自噬抑制剂 3⁃MA 确定 BA 对 THP⁃1 来源
25.0 μmol/L BA
100.0 μmol/L BA
0.5
150.0 μmol/L BA
的 M1 型细胞的炎症抑制作用是否依赖于 BA 的自
噬激活作用。3⁃MA 通过抑制Ⅲ类 PI3K 来抑制自
0
24 48 72 噬。通过Western blot检测3⁃MA预处理后的自噬抑
Time（h）
制效果，如图 4B 所示，M1+3⁃MA+BA 组中，3⁃MA 显
图2 CCK⁃8法测定THP⁃1细胞活力 著抑制了 LC3B⁃Ⅱ和 Beclin⁃1 的表达并增加 P62 的
Figure 2 The viability of THP⁃1 cells was determined by 表达，表明经过 3⁃MA 预处理后的巨噬细胞自噬通
CCK⁃8
量明显受阻，BA 的自噬激活作用受到影响。再用
（图 3B、C）结果显示，M1 组的 IL⁃1β表达较 M0 组 RT⁃PCR 检测 IL⁃1β及 IL⁃8 的 mRNA 表达水平，与
明显升高，而加入 BA 后，IL⁃1β的表达明显下调。 M1+BA组相比，3⁃MA的加入抵消了BA的炎症抑制

RT⁃PCR 检测结果显示（图 3A），与 M1 组相比，BA 作用（图 4C）。Western blot 结果也同样表明，3⁃MA
（50 μmol/L）孵育 24 h 可以显著降低 iNOS（M1 生物 通过阻断自噬逆转了 BA 对 IL⁃1β表达的影响（图
标志物）的表达，而与 M0 组相比，BA 对 M0 型巨噬 4B）。
细胞无明显影响。免疫荧光染色也得到了同样的 2.6 BA 处理的 THP⁃1 来源 M1 巨噬细胞培养液上
结果（图3D）。 清对hDPSC成牙/骨分化的影响

2.4 BA增加THP⁃1来源M1巨噬细胞的自噬 为了进一步探索BA 能否通过影响巨噬细胞的
利用Western blot检测自噬相关标志物LC3B⁃Ⅱ、 生物学表现间接影响 hDPSC 的功能，将 M0、M1、
Beclin⁃1 及 P62 的表达，与 M1 组相比，BA 诱导后的 M1+BA 3 组细胞按上述方法培养后分离上清得到
M1 组细胞 LC3B⁃Ⅱ和 Beclin⁃1 的表达增加，P62 的 CM，并用其处理hDPSC，判断hDPSC的成牙/骨能力
表达减少（图4A），提示BA处理后MI巨噬细胞自噬 是否出现变化（图 5A）。在成骨诱导培养液中培养