Page 82 - 《南京医科大学学报（自然科学版）》2025年第9期
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第45卷第9期
               ·1294 ·                           南 京    医 科 大 学 学         报                        2025年9月


                  亲子鉴定案例是司法鉴定案件中较为常见的                           Penta E、TH01、D12S391、D2S1338、FGA）和1个性别
              案例类型，用以确认被检测者间的亲缘关系。在进                            基因座（AMEL）。若检测出现 1~2 个不符合遗传规
              行亲子鉴定的过程中，通过对人类遗传物质进行标                            律的 STR 基因座，则采用 GoldenEye 22NC 荧光检
                                                                                                 TM
              记，可直观呈现个体间遗传关系              ［1-2］ 。短串联重复序         测试剂盒，增加遗传标记的检测数量，包括 21 个常
              列（short tandem repeat，STR）是亲子鉴定过程中最               染 色 体 基 因 座（D4S2366、D6S477、GATA198B05、
              常用的 DNA 长度多态性遗传标记，具有准确性高、                         D15S659、D8S1132、D3S1358、D3S3045、D14S608、
              鉴别能力强以及多态性程度高等特点                 ［3-4］ 。然而，在      D17S1290、D3S1744、D2S441、D18S535、D13S325、
              实际应用中发现，STR存在基因突变现象，使亲代和                          D7S1517、D10S1435、D11S2368、D19S253、D1S1656、
              子代在遗传标志物方面出现不符合遗传规律的特                             D7S3048、D10S1248、D5S2500）和 AMEL 性别基因
              点，最终可能影响亲子鉴定的准确性 。目前未见                            座。去除重复位点，总计共39个STR基因座的等位
                                               ［5］
              针对江苏地区人群亲子鉴定中 STR 基因座突变的                          基因分型。对于三步突变基因座采用Microreader                  TM
              分析报道，为明确该地区人群STR 基因座的突变情                          21ID System（苏州阅微基因技术有限公司）体系进行验
              况，本研究对江苏地区 6 812 例亲子鉴定案例中基                        证。在鉴定工作中，相应操作均由具备5年以上亲子鉴
              因突变位点、突变频率和突变来源等特征进行统计                            定工作经验且拥有司法鉴定人执业证人员开展，严格
              分析，为该地区亲子鉴定遗传标记的选择提供了数                            落实各环节操作并做好实时记录，避免因鉴定过程中
              据支撑，有助于提升复杂亲缘关系鉴定准确性。                             人为原因影响检测结果，以保证鉴定结果的准确性。
                                                                1.3 统计学方法
              1  对象和方法
                                                                     参考《亲权鉴定技术规范》 GB/T 37223⁃2018，
                                                                                            ［6］
                                                                                                       TM
              1.1  对象                                           对“支持”亲子关系的标准如下：GoldenEye 20A 检
                  回顾 2019 年 1 月—2024 年 12 月南京医科大学               测19个STR基因座，分型结果均符合孟德尔遗传规
              第一附属医院司法鉴定所采集的6 812例亲子鉴定                          律，且亲权指数（paternity index，PI）>10 000。若出
              案例为观察样本，针对检查过程中基因突变情况进                            现 1~2 个 基 因 座 违 反 遗 传 规 律 ，经 加 测 Gold⁃
              行观察与分析。案例覆盖江苏省13个地级市，其中                           enEye 22NC荧光检测试剂盒补充至39个STR基因
                                                                     TM
              南京34.76%、徐州13.56%、无锡9.99%、淮安6.11%、                座联合应用进行判断，未发现新的违反遗传规律的
              宿迁 5.71%，其余地区（南通、镇江等）占 29.89% 。                   基因座或总的违反遗传规律的基因座数目<4，且计
              案例中 1 680 例为三联体（母⁃子⁃父），5 132例为                    算PI>10 000，也判定为“支持”亲子关系。
              二联体（父⁃子4 579例，母⁃子553例）。所有案例鉴                           根据直接计数法计算相应基因座的突变率，突
              定结论均为“支持”亲子关系。案例样本包括血斑、                           变率=突变数/（双亲案例数×2+单亲案例数）。参照
              带毛囊的毛发等法医学中常见的生物检材。本研                             Brinkmann 等 报道方法确定检测到突变的 21 个
                                                                            ［7］
              究经南京医科大学第一附属医院伦理委员会批准，                            STR基因座的突变来源：在双亲的等位基因中，以距
              研究对象均签署知情同意书。                                     突变成的新等位基因步数相差最小的等位基因为
              1.2  方法                                           发生突变的等位基因；在步数相差相等时，根据结
                  检测试剂采用 GoldenEye DNA 身份鉴定系统                   构相似程度来判断，结构最相似者为突变来源，否则
                                         TM
              的20A、22NC（直扩型）试剂盒（北京基点认知技术有                       判为来源不确定。统计分析采用SPSS 22.0软件，组
              限公司）。样本免提取，用GoldenEye 20A直接进行                     间比较采用χ 检验，P < 0.05为差异有统计学意义。
                                              TM
                                                                            2
              PCR扩增，取PCR扩增产物1 μL，每孔加入8.5 μL甲
                                                                2  结 果
              酰胺及0.5 μL分子量内标，同时设置Ladder和H2O、
              9 947 阴阳性对照孔，充分混匀后瞬时离心。采用                         2.1  突变率和突变来源分析
              3 130 自动遗传分析仪（AB 公司，美国）进行毛细管                           在 6 812 例认定亲子关系的案例中，三联体
              电泳，使用GeneMapper ID⁃X 软件分析，获得被检测                   1 680 例，二联体 5 132 例，共 8 492 次减数分裂。观
              样本 20 个 STR 基因座的突变信息，包括 19 个常染                    察到214例突变案件，根据突变率计算公式，总突变
              色 体 STR 基 因 座（D19S433、D5S818、D21S11、              率为 2.52%。21 个 STR 基因座检测到突变发生，突
              D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D7S820、            变率介于 0.011 8 %~0.329 7%（表 1）。D12S391 位
              D16S539、CSF1PO、Penta D、vWA、D8S1179、TPOX、          点突变率最高，为 0.329 7%（28/8 492）；其后依次为
   77   78   79   80   81   82   83   84   85   86   87