Page 36 - 南京医科大学自然版

第46卷第5期
·658 · 南 京 医 科 大 学 学 报 2026年5月

siNC siPTPN6⁃1
A B 10 4 Q1 Q2 10 4 Q1 Q2 25 ***
siPTPN6⁃2
siNC siPTPN6⁃1 10 3 0.74% 1.67% 10 3 0.32% 1.86% （%） 20
PTPN6 68 kDa 15
PI 10 2 PI 10 2
β⁃actin 42 kDa Apoptosis cells 10
10 1 Q4 Q3 10 1 Q4 Q3 5
PTPN6 1.5 *** *** 10 0 10 92.90% 1 Annexin V 10 3 10 4 10 0 10 82.90% 1 Annexin V 14.90% 10 4 0 siNC
4.70%
0
0
2
3
2
10
10
10
10
10
siPTPN6⁃1
Relateve expression of 0.5 D siNC siPTPN6⁃1 siPTPN6⁃2 0.5 * ***
1.0
0
siPTPN6⁃1
siNC siPTPN6⁃2 DAPI Relateve EdU positive eclls 0.4
0.3
0.2
EdU 0 siNC siPTPN6⁃2
C 0.1
siPTPN6⁃1
4
Normalized cell index 3 2 1 siPTPN6⁃1 *** *** *** *** Merge
siNC
siPTPN6⁃2

0 *** **
0 1 2 3 4
Time（days）
A：The protein and mRNA levels of PTPN6 were detected by qRT⁃PCR and Western blot（n=4）. B：The apoptosis rate of AGS cells was detected by
flow cytometry（n=3）. C：The level of cell proliferation was detected by CCK⁃8 assay（n=4）. D：The level of cell proliferation was detected by EdU assay
**
*
（scale bar=50 μm n=3）. P < 0.05，P < 0.01，and *** P < 0.001.
图2 敲低PTPN6基因抑制AGS细胞的增殖能力并促进其凋亡
Figure 2 Knockdown of PTPN6 inhibited the proliferation and promoted the apoptosis of AGS cells

细胞和 MKN1 细胞。48 h 后，检测显示 PTPN6⁃OE 型。免疫组化结果显示 GCO 表达胃癌特异性标志
组 mRNA（图 3A）和蛋白（图 3B）水平均显著升高。 物 CK7（图 4B）；全外显子组测序分析表明，GCO
CCK⁃8实验（图3C）、克隆形成实验（图3D）和EdU实 （GTO1）与其配对的原发组织在基因组特征上高度
验（图 3E）检测发现，与 NC 转染组相比，PTPN6⁃OE 一致，表现为共享524个突变，分别占各自总突变的
组的 AGS 细胞和 MKN1 细胞增殖能力显著增强。 73%和61%（图4C）；且在突变特征（图4D）、转换/颠
Transwell实验检测发现，与NC转染组相比，PTPN6⁃ 换比率（图 4E）以及拷贝数变异（图 4F）等方面均保
OE组的AGS（图3F）细胞和MKN1细胞（图3G）迁移和 持高度一致性。以上结果表明，GCO能够有效重现
侵袭能力明显增加。上述结果表明，过表达PTPN6基 原发肿瘤组织的基因组特征，是后续机制研究的理
因可促进胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。 想模型。

2.4 PTPN6的高表达抑制NK细胞对胃癌细胞和胃 基于此，进一步构建 GCO 和 NK 细胞共培养模
癌类器官杀伤活性 型，将类器官铺在基质胶表面，使NK细胞能够自由
为了评估PTPN6基因表达对NK细胞杀伤活性 移动并与类器官保持接触，同时维持类器官的三维
的调控作用，将 MKN1 细胞与 NK92MI 细胞进行体 结构。共培养 4 h 后，显微镜下可以观察到明显的
外共培养，并通过流式细胞术检测胃癌细胞的凋亡 类器官裂解现象（图 4G）。进而构建 PTPN6 稳定过
水平，发现与对照组相比，siPTPN6 组的 MKN1 细胞 表达的 GCO（图 4H），并与 NK92MI 细胞进行共培
对NK细胞介导的杀伤作用更加敏感（图4A）。 养，发现与对照组相比，PTPN6过表达组GCO对NK
为进一步验证这一现象，本研究建立了GCO模 细胞的杀伤更具耐受性（图4I）。